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2018.07.04
研究多胺對聚合酶連鎖反應的影響
族群: 跨族群  
主題: 學術研究  
作者 瑪蓋.巴然
學校系所 國立臺灣海洋大學 生命科學暨生物科技學系
地點 全臺 全部  
研究內容

 PCR 技術被廣泛應用於生物檢測,但 PCR 檢測的實務上卻常受限於生物樣品中 PCR 抑制劑的影響而降低 PCR 擴增效率,導致檢測人員誤判假陰性結果。過去文獻指出,在 PCR 反應中添加多胺類中的亞精胺 (spermidine) 可以抵抗 PCR 抑制劑對於 PCR 產生的負面影響。但也有文獻提出,過多的多胺類也會抑制 PCR 反應的進行。由於多胺類也廣泛存在於各種生物樣品中,究竟多胺類對於 PCR 反應具有何種影響需要進行進一步的研究。本實驗選擇了 6 種常見於各式生物樣品中的 PCR 抑制劑,有系統地探討單純添加這些抑制劑時,是否能被多胺影響而恢復正常 PCR 的能力。實驗結果顯示多胺對於膽鹽 (bile salt)、血色素 (hemin)、腐酸 (humic acid) 沒有明顯改善的效果,即使加入高達 6 mM 的多胺仍無法恢復正常 PCR 反應。但是多胺類卻能有效恢復肝素 (heparin)、檸檬酸鈉 (sodium citrate) 和黑色素 (melanin) 的抑制影響。進一步的分析顯示,含有正電荷價數越少的多胺類,例如腐胺 (putrescine) 需要 2 mM 以上的高濃度才能恢復肝素的抑制效果;但正電荷較多的亞精胺則只需要 0.7 mM,甚至精胺 (spermine) 更只要低於 0.07 mM 就有效果。因此推測多胺對抗 PCR 抑制劑的作用機轉與正電荷有關。最後本實驗以多胺作為 PCR 添加劑對抗含有複雜抑制劑的血液和糞便樣品,結果證明多胺類對直接 PCR (direct PCR) 具有極大的助益,而在糞便樣品也顯示一樣結果。因此,多胺作為 PCR 添加劑對於醫療檢測領域的助益具有極大的潛力,而本研究的結果也有助於了解多胺類在 PCR 反應中的正確添加劑量。

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